Page 48 - e-magazine

48www.media-matter.com
ต่ อไป สายดีเอ็นเอชิ้นที่สองจะมีลำ�ดั บเบสเหมือนกับลำ�ดั บเบสเป้าหมาย
และจะถู กตรวจจับโดยใช้โมเลคูลาร์เบคอนโพรบ (Specific molecular
beacon probe) สัญญาณฟลูออเรสเซนส์จะเกิดขึ้นแบบรีลไทม์ การ
ขยายสัญญาณและการตรวจจับจะใช้เวลาเพียง 10 นาที กระบวนการ
วิเคราะห์จะใช้ อุณหภูมิคงที่ 56°C โดยใช้เครื่องตรวจจับสัญญาณฟลู ออ
เรสเซนส์แบบควบคุมอุณหภูมิ ซอฟท์ แวร์จะวิเคราะห์สัญญาณฟลูออเรส
เซนส์และอัลกอริทึมประมวลผลจะรายงานผลเป็น ลบ บวก หรือรายงาน
ผลไม่ได้ (negative, positive, invalid) โดยขึ้นอยู่กับค่าอ้างอิง อัตรา
การเปลี่ยนแปลง และตัวชี้วัดอื่นๆ หลอดบรรจุ สารเคมีแต่ละหลอดจะมี
ประกอบด้วยตัวอย่างควบคุมที่ให้ผลบวก ซึ่งให้สัญญาณฟลูออเรสเซนส์
ในช่องที ่สองไม่ว่ าจะมีดีเอ็ นเอเป้าหมายหรือไม่ และเป็นตัวแสดงว่าสาร
เคมีที่ ใช้ทำ �งานได้อย่างถูกต้ อง
การวิเคราะห์ทำ�ได้ง่ายและลดเวลาที่ต้ องใช้ในการวิเคราะห์เมื่อเทียบ
กับการวิเคราะห์วิธี การอื่น ขั้ นตอนแรก ใส่ตัวอย่างที่เพิ่ มจำ�นวนดีเอ็นเอ
แล้วในปริมาณน้อยในหลอดทดลอง เติมไลซิสบัฟเฟอร์ลงในหลอดทดลอง
จากนั้ นนำ�ไปให้ความร้อนในฮีทบล็อคนาน 10 นาที (สำ�หรับซัลโมเนลลา
แต่หากเป็นการวิ เคราะห์ลิสทีเรีย จะต้องทำ �การบ่มเป็นเวลาสั้นๆ สอง
รอบ) ตัวอย่างจำ�นวนเล็ กน้อยจะถูกแบ่ งใส่ลงในหลอดทำ �ปฏิกิริยาและ
นำ �เข้าเครื่องอ่าน
การวิ เคราะห์ซัลโมเนลลาใช้เวลาในการวิเคราะห์ ตัวอย่างที่เพิ่มดีเอ็ นเอ
แล้วเพียง 10 นาที ในขณะที่การวิเคราะห์ลิสที เรียใช้เวลาเพียง 18 นาที
การวิ เคราะห์เชื้อทั้งสองชนิดได้รับการรับรองจากสถาบันวิจัย AOAC ซึ่ง
เป็นหน่วยงานตรวจสอบความใช้ได้ของวิธี การวิเคราะห์ที่ได้รับความเชื่อถือ
การศึ กษาความใช้ได้ของการวิเคราะห์อย่างต่อเนื่ อง
การวิเคราะห์เชื้อทั้ งสองชนิดถูกทดสอบอย่างกว้ างขวาง การทดสอบความ
ครอบคลุมของวิธีการวิเคราะห์ การวิเคราะห์ซัลโมเนลลาของเครื่อง ANSRTM
ได้รับการทดสอบโดยใช้เชื้อ 113 สายพันธุ์ จากสปีซีส์ S almonella
enterica และ Salmonella bongori ซึ่งมี สายพันธุ์ต่างๆ 109 ซี โรวาร์
และซัลโมเนลาจากกลุ่ มพันธุกรรมย่อย ทุกสายพันธุ์ถูกเลี้ยงในระบบ ANSRTM
สามชุดด้ วยอาหารเหลวสำ�หรับเชื้อซัลโมเนลลา ทุกสายพันธุ์สามารถตรวจ
จับได้ ยกเว้น S. Weslaco ซึ่งเป็นซี โรวาร์ที่พบได้ยาก
การตรวจสอบเชื้ อซัลโมเนลลาโดยใช้ ANSRTM ผ่ านการทดสอบโดย
ใช้ ตัวอย่างหลายชนิด ได้แก่ เนื้อวัวสดบด เนื้อไก่งวงบดสด น้ำ�ล้างซาก
ไก่ ฮอทดอก ซีเรียลข้าวโอ็ต แป้งถั่วเหลือง ผงโกโก้ เนยถั่ว อัลมอนด์
อาหารสั ตว์แบบแห้ง ไข่ผงพาสเจอไรส์ พริกไทยดำ� ไอศครีม กุ้งดิบ และ
ผักปวยเล้งสด และการวิเคราะห์สิ่งแวดล้อม ได้แก่ พลาสติก คอนกรีต
ขัดมั น กระเบื้องเซรามิค และผิวยาง
การวิ เคราะห์เชื้อลิสทีเรี ยโดยใช้ ANSRTM ได้รับการรับรองโดย AOAC
ในการวิเคราะห์สิ่งแวดล้ อม ได้แก่ ตัวอย่ างจากการสวอบและซับผิว
สเตนเลสสตีล พลาสติ ก กระเบื้องเซรามิ ค คอนกรีตขั ดมัน และยาง
เนื่องจากลิสที เรียเป็นเชื้ อก่อโรคที่ อยู่ในสิ่งแวดล้อมจึงจำ�เป็นต้องทดสอบ
ทั้ งผลิตภัณฑ์ และพื้นที่ผลิต
การวิ เคราะห์ที่รวดเร็วและเชื่อถือได้เป็นอนาคตของการวิเคราะห์ จุลินทรีย์
ก่อโรคเนื่องจากเป็นวิธีการที่ รวดเร็ว ทำ�ให้สามารถกำ�หนดมาตรการแก้ไข
ได้รวดเร็วกว่าและใช้เวลาทำ�การวิ เคราะห์น้ อยกว่า มอบข้อมู ลที่ผู้ ผลิต
ต้ องการสำ�หรับการปกป้องสุขภาพและการแก้ไขปัญหาในโรงงานของตน
fluorescence detection instrument. Assay software analyzes the
fluorescent signal over time and a data interpretation algorithm
interprets results as negative, positive or invalid based on baseline,
rate-of-change, and other criteria. Each tube of reagents also contains
an internal positive control, signaling in a second fluorescence
channel irrespective of the presence of target DNA, and indicating
proper function of the amplification reagents.
The assays are easy to perform and cut back on the amount of
hands-on time present with other methods. First, a small portion
of the enriched sample is placed into a cluster tube. Lysis buffer is
added and the tubes are transferred to a heater block for 10minutes
(for Salmonella, the Listeria assay has two short assay incubations).
Small portions of the samples then are transferred to the reaction
tubes and placed into the reader.
The Salmonella assay takes only 10 minutes to results post-
enrichment, while the Listeria assay takes only 18 minutes. Both
assays have received approval from the AOAC Research Institute,
a prestigious third party validation group. These validations
independently confirm the assays’ performance is equivalent to
the US governmental reference methods.
Extensive Validation Studies
Both assays have undergone extensive validation studies. In regard to
inclusivity testing, ANSRTM for Salmonellawas testedusing 113 strains
of Salmonella enterica and Salmonella bongori, which represented
109 serovars and all Salmonella genetic subgroups. All strains were
grown in the threeANSR for Salmonella enrichment broths with all
strains detected with the exception of the rare serovar, S. Weslaco.
ANSRTM for Salmonella has been validated for numerous
commodities, including rawgroundbeef, rawground turkey, chicken
carcass rinse, hot dogs, oat cereal, soy flour, cocoa powder, peanut
butter, almonds, dry pet food, dried pasteurized egg, black pepper,
ice cream, raw shrimp and raw spinach, and environmental samples
such as plastic, sealed concrete, ceramic tile and rubber surfaces.
ANSRTM for Listeria is AOAC approved for a variety of
environmental samples, including swab and sponge samples from
stainless steel, plastic, ceramic tile, sealed concrete and rubber. Since
Listeria is an environmental pathogen, it is crucial to test not only
products but productions areas as well.
Rapid and definitive assays are the future of pathogen testing as
they provide actionable results earlier andwith less hands-on time,
providing producers the information they need to protect public
health and remedy issues in their facilities.
Article info
World Health Organization (WHO), 2008
Centers for Disease Control and Prevention (CDC), 2011
Lab Analysis
ENTRY No. a008